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食品安全国家标准 食品营养强化剂 血红素铁2023-标准全文及说明.pdf
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中华人民共和国国家标准 GB — ×××× ×××× 食品安全国家标准 食品营养强化剂 血红素铁 （征求意见稿） ××××-××-××发布 ××××-××-××实施 GB ××××—×××× 食品安全国家标准 食品营养强化剂 血红素铁 1 范围 本标准适用于以检验检疫合格的动物血液或经离心分离得到的血球液为原料，经酶解、分 离、干燥制得的食品营养强化剂血红素铁。 2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量 2.1 化学名称 血红素铁 2.2 分子式 C H FeN O 34 32 4 4 2.3 结构式 2.4 相对分子质量 616.48 （按2018年国际相对原子质量） 3 技术方面的要求 3.1 感官要求 感官要求应符合表 1 的规定。 表1 感官要求 项 目 要 求 检测验证的方法 色泽 红褐色至黑褐色 取适量试样置于洁净、干燥的透明玻璃器皿中，在 状态 粉末或颗粒 自然光下观察色泽、状态，嗅其气味，观察其杂质 1 GB ××××—×××× 气味 无味或轻微的血红素铁特征性气味 杂质 无肉眼可见杂质 3.2 理化指标 理化指标应符合表2 的规定。 表2 理化指标 项 目 指 标 检测验证的方法 铁（以Fe 计），w/% 1.0～2.6 GB 5009.90 血红素铁（以C H FeN O 计），w/% 9.0～27.0 附录A 中A.3 34 32 4 4 干燥减量，w/% ≤ 6.0 GB 5009.3 （直接干燥法） 灼烧残渣，w/% ≤ 12.0 GB 5009.4 铅（Pb ）/ （mg/kg） ≤ 2.0 GB 5009.75 或GB 5009.12 总砷（以As 计）/ （mg/kg） ≤ 2.0 GB 5009.76 或GB 5009.1 1 3.3 微生物限量 微生物限量应符合表3 的规定。 表3 微生物限量 限 量a 项 目 检测验证的方法 n c m M 沙门氏菌/25g 5 0 0 - GB 4789.4 金黄色葡萄球菌/ （CFU/g） 5 1 100 1000 GB 4789.10 第二法 a 样品的采样和处理按GB 4789.1 执行。 2 GB ××××—×××× 附录A 检测验证的方法 A.1 一般规定 本标准的检测验证的方法中所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682 规定的三级水。试验中所用溶液在未标明用何种溶剂配制时，均指水溶液，所用溶液以“%”表 示的均为质量分数。 A.2 鉴别试验 A.2.1 试剂和材料 A.2.1.1 氢氧化钠。 A.2.1.2 吡啶。 A.2.1.3 次亚硫酸钠。 A.2.1.4 硝酸：色谱纯。 A.2.1.5 氨水。 A.2.1.6 1 mol/L氢氧化钠溶液：称取40.0 g氢氧化钠，用无二氧化碳的水溶解并定容至1 L。 A.2.1.7 吡啶氢氧化钠溶液：100 mL吡啶，加入30 mL1 mol/L氢氧化钠溶液，用水稀释至300 mL 。 A.2.2 仪器和设备 A.2.2.1 分析天平：感量0.0001 g 。 A.2.2.2 水浴箱。 A.2.3 鉴别方法 A.2.3.1 呈色试验 将 10 mg 血红素铁溶解在50 mL 的吡啶氢氧化钠溶液中，取5 mL 该溶液，加入 15 mg 的 次亚硫酸钠，溶液变成红色。 A.2.3.2 呈色试验 将 10 mg 血红素铁放在 100 mL 烧杯中，加入5 mL 硝酸，加热，变成黄色，冷却后用氨 水碱化，颜色变成橙黄色。 A.2.3.3 紫外光谱法 将 10 mg 血红素铁溶解在50 mL 的吡啶氢氧化钠溶液中，在紫外光扫描谱图中，在399 nm 波长处具有最大吸收。 A.3 血红素铁(C H FeN O )含量的测定 34 32 4 4 A.3.1 方法提要 样品中的血红素铁用吡啶氢氧化钠溶解，用C18 色谱柱分离，液相色谱仪测定，外标法定 量。 A.3.2 试剂和材料 除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 A.3.2.1 甲醇：色谱纯。 A.3.2.2 甲酸：色谱纯。 A.3.2.3 氢氧化钠。 A.3.2.4 吡啶。 3 GB ××××—×××× A.3.2.5 羟高铁血红素（C H FeN O ，CAS 号：15489-90-4 ）标准品：含量≥98.0%。 34 33 4 5 A.3.2.6 1 mol/L 氢氧化钠溶液：称取40.0 g 氢氧化钠，用无二氧化碳的水溶解并定容至 1 L。 A.3.2.7 吡啶氢氧化钠溶液：100 mL 吡啶，加入30 mL1 mol/L 氢氧化钠溶液，用水稀释至 300 mL。 A.3.2.8 羟高铁血红素标准储备液：准确称取 100℃干燥3 小时的羟高铁血红素0.1028 g，用 吡啶氢氧化钠溶液（A.3.2.7 ）溶解并定容至100 mL，此溶液相当于血红素铁1 mg/mL。0～4 ℃ 避光保存，使用期不超过 1 周。 A.3.3 仪器和设备 A.3.3.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。 A.3.3.2 分析天平：感量0.0001 g 。 A.3.3.3 超声波发生器：功率大于 180 W。 A.3.3.4 离心机：大于4000 r/min 。 A.3.3.5 液相色谱参考条件 A.3.3.5.1 色谱柱：C18 柱，柱长250 mm ，内径4.6 mm ，粒径5 µm 或等效色谱柱。 A.3.3.5.2 流动相：甲醇+0.1% 甲酸水溶液（70+30，V+V）。 A.3.3.5.3 流速：1.0 mL/min。 A.3.3.5.4 柱温：30℃。 A.3.3.5.5 进样量：5.0 µL。 A.3.3.5.6 检测波长：399 nm 。 A.3.3.6 分析步骤 准确称取试样0.1 g，精确至0.001 g，用吡啶氢氧化钠溶液（A.3.2.7 ）溶解，避光条件下超 声波助溶10 min，转移至 50 mL容量瓶中，用吡啶氢氧化钠溶液定容至刻度，混匀，取该溶液 1 mL，用吡啶氢氧化钠溶液稀释至10 mL，4000 r/min离心10 min，取上清液，过0.45 µm滤膜， 液相色谱测定。并做空白试验，除不加试样外，其他操作与测定试样相同。 A.3.4 定性分析 依据保留时间一致性进行定性识别的方法，根据血红素铁标准品的保留时间，确定样品中 血红素铁的色谱峰（见附录B）。 A.3.5 定量分析 分别取羟高铁血红素标准储备液（A.3.2.8 ）0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、 5.00 mL 于50 mL 容量瓶中，用吡啶氢氧化钠溶液（A.3.2.7 ）定容，配制成相当于血红素铁溶 液浓度分别为5 µg/mL、10 µg/mL、20 µg/mL、40 µg/mL、60 µg/mL、100 µg/mL 的标准溶液， 液相色谱测定，以血红素铁浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 用标准工作曲线对试样进行定量，标准工作溶液和试样中血红素铁的响应值均应在仪器的 检测线 的色谱条件下，羟高铁血红素标准品和血红素样品的色谱图参见附录B。 A.3.6 结果计算 血红素铁(C H FeN O )含量的质量分数 (%)计，按公式（A.1 ）计算： 34 32 4 4 w1 …………………… （A.1 ） 式中： c——试样溶液中血红素铁的质量浓度，单位为微克每毫升（µg/mL ）； 4 GB ××××—×××× c ——空白试验中血红素铁的质量浓度，单位为微克每毫升（µg/mL ）； 0 V——试样定容总体积，单位为毫升（mL ）； f ——试样稀释倍数； m——试样称取质量，单位为克（g ）； 取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于2.0% 。 5 GB ××××—×××× 附录B 液相色谱图 羟高铁血红素标准品液相色谱图如图B.1 所示。 B.1 羟高铁血红素标准品（浓度以血红素铁计）液相色谱图 血红素铁样品液相色谱图如图B.2所示。 B.2 血红素铁样品液相色谱图 6 《食品安全国家标准食品营养强化剂 血红素铁》（征求意 见稿）编制说明 一、标准起草基本情况 本标准于2016 年立项（项目编号 spaq-2016- 155），项目承担单位为青岛大学营养与健 康研究院。2017 年4 月5 日真正开始启动，2017 年4 月26-27 日在上海召开了该标准的指标制 定研讨会，2017 年5 月 10 日至7 月20 日开展样品的收集和检测工作，2017 年7 月28 日形 成草案，2017 年8 月 10 日至8 月31 日进行行业内征求意见，2018 年3 月27 日形成《食品 安全国家标准 食品营养强化剂 血红素铁》草稿。2022 年4 月 19 日经第二届食品安全国家 标准审评委员会营养与特殊膳食食品专业委员会第七次会议审核检查通过。 二、标准的主要技术内容 本标准的制定主要参考了日本食品添加剂公定书（第 9 版）、韩国食品添加剂公典 （2021-19），并结合产品的实际质量情况，初步确定指标为感官要求、铁（以Fe 计）、血红 素铁（以C H FeN O 计）、干燥减量、灼烧残渣、铅（Pb）、总砷（以As 计）、沙门氏菌、 34 32 4 4 金黄色葡萄球菌。与日本食品添加剂公定书（第 9 版）相比，本标准增加了血红素铁（以 C H FeN O 计）和微生物限量（沙门氏菌和金黄色葡萄球菌）；与韩国食品添加剂公典 34 32 4 4 （2021-19）相比，本标准增加了微生物限量（沙门氏菌和金黄色葡萄球菌）。 三、国内外相关法规标准情况 本标准为首次制定。课题组查阅了JECFA （79th June 2014 ）、美国药典（USP 40 ）、欧洲 药典（EP 8.0 ）、英国药典（BP 2017 ）、日本食品添加剂公定书（第9 版）、韩国食品添加剂 公典（2021- 19）等国际上相关食品营养强化剂文献，只有日本食品添加剂公定书（JSSFA 第 9 版）、韩国食品添加剂公典（2021- 19）有有关要求，其他均无规定。具体指标和检测的新方法 对比见表 1 和表2 。 四、别的需要说明的事项 暂无。 表 1 国内外血红素铁标准技术指标对比表 项目 日本食品添加剂公定书 （第9 版） 韩国食品添加剂公典（2021- 19） 食品营养强化剂 血红素铁 工艺描述 本品是由蛋白质分解酶处理血红蛋 血红素是通过分离酶处理后的血红蛋白 本标准适用于以检验检疫合格的动物血 白分离后得到的，主要成分是血红 得到的，它的成分是亚铁血红素。 液或经离心分离得到的血球液为原料， 素铁。 经酶解、分离、干燥制得的食品营养强 化剂血红素铁。 产品描述（外观/性状） 褐色至黑褐色。 黑褐色 红褐色至黑褐色 组织状态 粉末或颗粒。 粉末或颗粒 粉末或颗粒。 气味 无味或轻微独特的气味 无味或轻微的特征性气味 无味或轻微的血红素铁特征性气味 分子量 —— 616.48(C H FeN O = 616.48) 616.48 34 32 4 4 鉴别 ① 颜色反应。 ① 颜色反应。 ① 呈色试验。 ② 颜色反应。 ② 颜色反应。 ② 呈色试验。 ③ 颜色反应 ③ 紫外光谱法。 铁含量（以Fe 计），w/% 1.0～2.6 1.0~2.6 1.0～2.6 血红素铁含量 （以 —— 9.0~27.0 9.0~27.0 C H FeN O 计）， w/% 34 32 4 4 干燥减量，w/% ≤5.0 ≤6.0 ≤6.0 灼烧残渣，w/% ≤12.0 ≤8.0 ≤12.0 铅（Pb ）/ （mg/kg ） ≤2 ≤2.0 ≤2.0 总砷（以As 计）/ （mg/kg ） ≤3 ≤4.0 ≤2.0 （参考同类营养强化剂） 微生物限量 —— —— 参考 《GB1903.52-2021 食品安全国家标 准 食品营养强化剂 氯化高铁血红素》， 制定了微生物限量指标，包括动物源性 食品中主要的致病菌沙门氏菌、金黄色 葡萄球菌等。 表2 国内外血红素铁标准检测的新方法对比表 标准 日本食品添加剂公定书（第9 版） 韩国食品添加剂公典 （2021- 19） 食品营养强化剂 血红素铁 项 目 （1）取本品10mg ，加入1mL 硫酸 （1）将 100mg 血红素铁溶于500mL 吡啶氢氧 （1）将10mg 血红素铁溶解在50mL 的吡啶 （1→20 ）、1mL 硝酸，在水浴上蒸干。 化钠溶液中。向
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